过氧化苯甲酰（BPO）
过氧化苯甲酰（BPO），分光法快粉中白色粉末，光度具有氧化性，速检售婴是测市一种典型的有机过氧化物，应用于化工、儿奶医疗和食品等领域。氧化早期在食品加工中，苯甲常被用作面粉和乳粉的分光法快粉中改良剂，具有改善粉体的光度外观品质，实现后熟和增白等效果。速检售婴但在改善粉体品质的测市过程中，过氧化苯甲酰会氧化掉面粉和乳粉中的儿奶营养物质成分，并在高温或高压的氧化烹饪过程中产生有毒的物质，对人体健康十分不利。苯甲
近年来，分光法快粉中食品安全问题屡屡发生，其中婴儿乳粉的安全问题尤为突出，以往乳粉生产企业广泛使用BPO作为增白剂改良乳制品，长期食用此类乳制品会导致婴儿肝脏受损继而引发慢性中毒。鉴于此，我国已明确禁止在乳制品中添加BPO，但仍是屡禁不止。常规的BPO检测方法有碘量法、色谱法、电化学分析法和光谱法等。其中，碘量法虽然操作方便，但只适用于常量分析；高效液相色谱虽具有操作简便、节省溶剂等优势，但国标法检测范围较窄；气相色谱法操作复杂，需反复提取浓缩，且与电化学法均需使用有毒试剂，绿色性较差。因此，需要构建一种快速简便、灵敏度高且重现性好的测定方法来检测婴儿乳粉中BPO的含量。
本研究对两种市售品牌婴儿奶粉中过氧化苯甲酰的检测建立了一套系统的检测方法。利用紫外分光光度法测定婴儿奶粉制品中的BPO含量，对检测方法进行优化，建立检测工作曲线，对该方法最低检出限、加标回收率和精密度进行了研究，相关研究结果将为乳制品中BPO的检测提供新的思路。
1 材料与方法
1.1 材料与设备
1.1.1 材料
婴儿乳粉（哈尔滨市家乐福超市）；过氧化苯甲酰、无水乙醇、硫酸亚铁铵、邻菲罗啉、结晶乙酸钠和冰乙酸（天津市科密欧化学试剂有限公司）。
1.1. 2设备
分光光度计和数显酸度计（杭州奥立龙仪器有限公司）；电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）；离心机（北京时代北利离心机有限公司）。
1.2 实验方法
1.2.1 过氧化苯甲酰（BPO）标准曲线的建立
准确吸取1.00mL浓度分别为0.001、0.0025、0.005、0.0075、0.01mg/mL的过氧化苯甲酰标准溶液于5个10mL离心管中，分别加入浓度为0.001mol/L的硫酸亚铁铵溶液1.0mL、乙酸-乙酸钠缓冲液3mL（优化后的pH），混匀后置水浴（优化后的温度）中反应一定时间（优化后的时间），取出后冷却至室温，加入浓度为0.003mol/L的邻菲罗啉溶液1.0mL，用蒸馏水定容至8mL，混匀，静置10min，在最适的波长测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
1.2.2 检测体系的优化
首先，在水相中优化过氧化苯甲酰（BPO）的检测体系，即不添加婴儿乳粉。方法如下：
准确吸取1.00mL浓度为0.1mg/mL的过氧化苯甲酰（BPO）标准溶液于10mL离心管中，加入浓度为0.001mol/L的硫酸亚铁铵溶液1.0mL、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH为3.5、3.8、4.1、4.4、4.8、5.1、5.4、6.0）3mL，混匀后置不同温度（23、30、40、50、60和70℃）水浴反应不同时间（1、2、4、6、8和10min），取出后冷却至室温，加入浓度为0.003mol/L的邻菲罗啉溶液1.0mL，用蒸馏水定容至8mL，混匀，静置10min，分别在480、490、500、510、520、530和540nm波长下采用1cm的比色皿测定其吸光度，确定最优反应条件。
1.2.3 市售婴儿奶粉中BPO检测工作曲线方程、线性范围和检出限的测定
精确称取市售奶粉样品2g，置于25mL离心管中，分别加入无水乙醇10.0mL并立即混匀，移取浓度为0.001、0.005、0.010、0.025、0.050、0.100和0.250mg/mL的BPO标准液10mL于离心管中。漩涡振荡5min，取出后静置10min，4000r/min的转速下离心30min，取上清液1mL于10mL离心管中，依次加入0.001mol/L的硫酸亚铁铵溶液1.0mL、乙酸-乙酸钠缓冲液3mL（优化后的pH），混匀后置水浴（优化后的温度）中反应一定时间（优化后的时间），取出冷却至室温后，再加入0.003mol/L的邻菲罗啉溶液1.0mL，混匀后从中取出1.0mL混合液于10mL离心管中，添加5.0mL蒸馏水，混匀，静置10min，稀释12倍后，在最适的波长下采用1cm的比色皿测定其吸光度。参考BPO标准曲线，计算体系中BPO的含量，以BPO添加浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，构建检测体系的工作曲线方程，并计算线性范围和最低检出限。
1.2.4 婴儿奶粉加标回收率和精密度测定
精确称取市售奶粉样品1g，置于25mL离心管中，分别加入无水乙醇10.0mL并立即混匀。在混匀状态下向每个重量相等的3个管中加入浓度为0.1、0.01和0.05mg/mL的过氧化苯甲酰标准溶液各10mL，每个浓度梯度分别做6组重复试验，漩涡振荡5min，取出后静置10min，6000r/min的转速下离心10min，取上清液1mL于10mL离心管中，依次加入0.001mol/L的硫酸亚铁铵溶液1.0mL、乙酸-乙酸钠缓冲液3mL（优化后的pH），混匀后置水浴（优化后的温度）中反应一定时间（优化后的时间），取出冷却至室温后，再加入0.003mol/L的邻菲罗啉溶液1.0mL，混匀后从中取出1.0mL混合液于10mL离心管中，添加5.0mL蒸馏水，混匀，静置10min，稀释12倍后，在最适的波长下采用1cm的比色皿测定其吸光度。参考工作曲线，计算加标回收率与精密度。
2 结果与讨论
2.1 BPO标准曲线的构建
分别准确移取质量浓度为0.001、0.0025、0.005、0.0075和0.01mg/mL的过氧化苯甲酰标准溶液，经过上述步骤处理后以无水乙醇为空白，在波长为510nm时得到一系列对应的吸光度值。并且以吸光度为纵坐标，添加BPO的浓度为横坐标，绘制标准曲线，如图1。
由图1可知，过氧化苯甲酰在浓度为0.1×10-3～0.1×10-2mg/mL范围内，与吸光度呈良好的线性拟合关系，标准曲线方程为y=-3.3302x+0.5583，R2=0.9951。
相关链接：过氧化苯甲酰，硫酸亚铁铵，邻菲罗啉，乙酸-乙酸钠
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