玫瑰(RosarugosaThunb)属蔷薇目,不同比较蔷薇科落叶灌木,产地成分主要包括重瓣玫瑰、大马大马士革玫瑰、士革百叶玫瑰、玫瑰香水月季等不同品种,精油主要分布于北半球,分析以保加利亚、不同比较摩洛哥、产地成分土耳其、大马法国、士革俄罗斯等国家,玫瑰其中保加利亚玫瑰最为著名。精油我国玫瑰资源也相当丰富,分析目前各地均有种植,不同比较其中以甘肃、北京、江苏、云南等地为主。玫瑰花精油含量一般在0.1%以下,精油包含醇类、烷烃类、酯类和萜烯类等多种特殊活性成分,已经被广泛应用于药品和化妆品等领域,具有护肤美容、舒缓情绪、抗氧化活性、抑菌杀菌、抗血栓及改善血液循环、抗肿瘤等不同功效。
保留时间指数法是目前使用广泛的分析定性方法,由于玫瑰精油中萜烯、醇类等类化合物存在同分异构体或同系物,仅用质谱库检索和匹配度定性会出现多种可能性,使化合物定性不准确,借助保留指数定性可提高其定性准确性。目前,国内外对玫瑰精油提取工艺及香气成分研究较多,但针对云南不同产地大马士革玫瑰精油成分差异的研究未见报道。本实验在前人研究的基础上,以云南玉溪峨山、曲靖沾益、昆明石林、大理云龙县种植的大马士革玫瑰花为研究对象,采用水蒸气蒸馏法提取精油结合GC/MS对其成分进行了对比分析,经质谱检索后,匹配度结合保留指数对其定性,较好地鉴别了同分异构体或同系物,避免了在定性过程中出现误判,提高定性的准确性。另外,通过对云南不同产地大马士革玫瑰精油成分系统研究,为其在药品和化妆品等领域应用提供了指导。
一、材料与方法
1、材料与设备
(1)材料与试剂
试验样品为2018年4月至6月采自云南玉溪峨山、曲靖沾益、昆明石林、大理云龙县种植的玫瑰花,品种为“大马士革玫瑰(Rosedamascene)”,从玫瑰植株中随机选取花蕊刚露的玫瑰花,带回实验室-20℃保鲜贮藏。
二氯甲烷、甲醇、乙醚、硫酸钠、正己烷,GR级,由百灵威科技有限公司提供;正构烷烃C7~C30,Sigma-Aidrich公司提供。
(2)仪器与设备
Agilent7890A/5975C气相色谱-质谱联用仪+自动进样器(美国安捷伦科技有限公司);98-1-B调温电热套(天津泰斯特仪器有限公司);磨口挥发油提取仪(北京市永光明医疗仪器厂);万分之一电子天平(瑞士MettlerTloede公司);5mL移液器(德国Eppendorf公司)。
2、方法
(1)玫瑰精油提取方法
参照文献方法,将云南不同产地大马士革玫瑰花,去除花托,将花瓣混合。称取约250g玫瑰花,置于圆底烧瓶中,加入1000mL蒸馏水浸泡12h,水蒸气蒸馏法提取4h,乙醚萃取流出液,低温除尽溶剂后无水硫酸钠干燥过滤,获得4种玫瑰精油备用,待进行GC/MS分析。
(2)玫瑰精油成分分析
准确称取玫瑰精油0.20g,用甲醇/二氯甲烷(体积比为1:4)混合溶液稀释到10mL,用0.45μm有机相滤膜过滤,直接进GC/MS分析。色谱条件:DB-5ms毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm),载气为氦气(纯度为99.999%),流速:1.0mL/min。升温程序:初始温度50℃,保持2min;以4℃/min的速率升温至230℃,保持20min。进样口温度:250℃,进样量:1.0μL,分流比:20:1,溶剂延迟6min。质谱条件:电轰击电离(EI)源;离子源温度:230℃;四极杆温度:150℃;电离能量:70eV;传输线温度:280℃;扫描范围(m/z):40~450,质谱检索图库:NIST谱库。
(3)定性方法
移取正构烷烃C7~C30标准品,用正己烷溶液将其稀释成质量分数为5%溶液,按照Agilent7890A/5975C气相色谱-质谱联用仪+自动进样器(美国安捷伦科技有限公司);98-1-B调温电热套(天津泰斯特仪器有限公司);磨口挥发油提取仪(北京市永光明医疗仪器厂);万分之一电子天平(瑞士MettlerTloede公司);5mL移液器(德国Eppendorf公司)这些仪器操作条件进样,求出正构烷烃C7~C30保留时间,为下一步计算玫瑰精油中各成分保留指数作准备。
根据VandenDool和Kratz的线性程序升温的保留指数原理,利用自编软件求得保留指数(KI)值:
式中:tR为保留时间,下标x表示待分析化合物,下标n和n+1分别表示正构烷烃的碳原子数。
玫瑰精油经过GC/MS分析后,利用仪器自带NIST质谱库对精油中化学成分进行自动检索,然后通过自我开发的保留指数软件求出各成分保留指数,将软件计算的保留指数与ESO精油数据库中保留指数进行比对(可接受误差不超过3%),对其进行定性。
二、结果与分析
1、玫瑰精油成分分析
云南不同产地大马士革玫瑰精油经GC/MS检测所得到总离子流色谱图见图1~4,其结果采用Nistll进行检索后结合ESO香精保留指数进行对比对其定性,利用面积归一化法计算得出玫瑰精油中各成分峰面积相对百分含量,结果见表1所示。
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